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数字 PCR 法定量低浓度水平短链 DNA 标准物质的研究

2155    2020-01-28

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作者:闻艳丽, 梁   文, 刘   刚

作者单位:上海市计量测试技术研究院化学与电离辐射计量研究所,上海 201203


关键词:DNA 标准物质; TP53 基因; 低浓度水平; 数字 PCR 法


摘要:

该文研制一种低浓度水平的短链 DNA 标准物质,用于低浓度水平 ctDNA 检测过程的量值溯源,重点对低浓度水平的短链基因标准物质的定值方法进行研究。首先选取 TP53 基因的一段 300 bp 长度的序列作为标准物质的目标序列,以数字 PCR 方法为研究方法,优化引物探针设计,通过考察 PCR 扩增的效率可以达到 98.6%,满足数字 PCR 方法扩增的要求;然后采用转基因玉米 NK603 质粒分子国家标准物质验证数字 PCR 方法定值的准确度和精密度;其次考察数字 PCR 方法定量低浓度短链 DNA 标准物质 TP53 的重复性和重现性分别为 2.99% 和 5.23%;最后采用数字 PCR 方法 8 家单位联合定值确定标准物质 TP53 的终浓度为(613.85±9.12)copies /μL(k=2),实现了对 低浓度水平短链 DNA 标准物质的定值。