作者：闻艳丽， 梁 文， 刘 刚
作者单位：上海市计量测试技术研究院化学与电离辐射计量研究所，上海 201203
关键词：DNA 标准物质; TP53 基因; 低浓度水平; 数字 PCR 法
摘要：
该文研制一种低浓度水平的短链 DNA 标准物质，用于低浓度水平 ctDNA 检测过程的量值溯源，重点对低浓度水平的短链基因标准物质的定值方法进行研究。首先选取 TP53 基因的一段 300 bp 长度的序列作为标准物质的目标序列，以数字 PCR 方法为研究方法，优化引物探针设计，通过考察 PCR 扩增的效率可以达到 98.6%，满足数字 PCR 方法扩增的要求；然后采用转基因玉米 NK603 质粒分子国家标准物质验证数字 PCR 方法定值的准确度和精密度；其次考察数字 PCR 方法定量低浓度短链 DNA 标准物质 TP53 的重复性和重现性分别为 2.99% 和 5.23%；最后采用数字 PCR 方法 8 家单位联合定值确定标准物质 TP53 的终浓度为（613.85±9.12）copies /μL（k=2），实现了对 低浓度水平短链 DNA 标准物质的定值。
