您好,欢迎来到中国测试科技资讯平台!

首页> 《中国测试》期刊 >本期导读>SYBR® GreenI实时PCR检测转Cry1Ab/c基因水稻

SYBR® GreenI实时PCR检测转Cry1Ab/c基因水稻

2685    2016-01-16

免费

全文售价

作者:王东1,2, 宋君1,2, 雷绍荣1,2, 刘勇2

作者单位:1. 四川省农业科学院分析测试中心, 四川成都 610066;
2. 农业部转基因植物环境安全监督检验测试中心, 四川成都 610066


关键词:生物安全; SYBR® Green I实时PCR; 转基因抗虫水稻; 外源基因; 熔解曲线; 检测


摘要:

为了建立转基因产品新型检测技术,采用SYBR Green I实时PCR技术和三对特异引物,检测抗虫转基因水稻外源基因(CaMV35S,NOS,Cry1Ab/c)。结果表明,利用SYBR Green I染料能结合双链DNA的特点,应用实时PCR技术可检测到转Cry1Ab/c基因抗虫水稻外源基因(CaMV35S,NOS,Cry1Ab/c)扩增所产生的荧光信号,通过扩增产物的熔解曲线能有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体。SYBR Green I实时PCR技术是转基因成分检测的一种新方法。


Detection for Bt transgenic rice with SYBR® Green I real time PCR

WANG Dong1,2, SONG Jun1,2, LEI Shao-rong1,2, LIU Yong2

1. Analysis and Testing Center, Sichuan Academy of Agriculture Science, Chengdu 610066, China;
2. Environmental Safety of Genetically Modified Plant Supervising and Testing Center of the Agriculture of Ministry, Chengdu 610066, China

Abstract: Bt genetically modified rice was identified with SYBR® Green I real-time PCR assays and three pairs of specific primers to establish a new detection technique for GMO. The results showed that the SYBR® Green I could selectively combine the characteristic of double chain DNA and identify fluoresce signal produced by sequence amplification of specific target of Bt rice(CaMV35S,NOS,Cry1Ab/c). The SYBR® Green I real-time PCR could availably differentiate special or non-special products and primer dimers by melting curve, which is a new method for GMO detection.

Keywords: Biosafety; SYBR® Green I real-time PCR; Bt rice; Exogenous gene; Melting curve; Detection

2009, 35(3): 84-86  收稿日期: 2008-11-12;收到修改稿日期: 2009-1-8

基金项目: 

作者简介: 王东(1975-),男,四川苍溪人,硕士,专业方向为转基因生物安全检测技术。

参考文献

[1] 唐 丁,郭龙彪,钱 前.水稻转基因技术与转基因水稻[J].中国稻米,2005(5):5-7.
[2] 李伟丰,杨 朗.转基因水稻检测方法的研究进展[J].生物技术通报,2006,20(5):58-61.
[3] 王小琦,张名昌,任志强,等.转基因水稻定性PCR检测体系的建立[J].中国粮油学报,2008,23(6):202-205.
[4] 黎昊雁,王 玮,李 聪,等.转基因水稻种子中外源元件的PCR检测[J].浙江农业学报,2001,13(3):169-171.
[5] 王育花,赵 森,陈 芬,等.利用实时荧光定量PCR法检测转基因水稻外源基因拷贝数的研究[J].生命科学研究,2007,11(4):301-305.
[6] 农业部953号公告-6-2007.转基因植物及其产品成分检测抗虫转Bt基因水稻定性PCR方法[S].北京:中国农业出版社,2008.
[7] 朱水芳.实时荧光PCR技术[M].北京:中国计量出版社,2003.
[8] 闻新棉,陈英剑,胡成进,等.实时荧光定量检测中引物二聚体的优化[J].国外医学临床生物化学与检验学分册,2005,7(26):444-446.
[9] GB/T 19495.3-2004,转基因产品检测核酸提取纯化方法[S].北京:中国标准出版社,2007.
[10] Bustin S A. Absolute quantification of mRNA using real2time reverse transcription polymerase chain reaction assays[J]. J. Mol. Endocrinol,2000,25(2):169-193.
[11] 杨立桃,赵志辉,丁嘉羽,等.利用实时荧光定量PCR 方法分析转基因水稻外源基因拷贝数[J].中国食品卫生杂志,2005,17(2):140-144.
[12] 张驰宇,张高红,杨 敏,等.四步法消除SYBR® Green Ⅰ实时定量RT2PCR中引物二聚体的影响[J].中国生物化学与分子生物学报,2004,20(3):387-392.